1.摘 要

文献泉源:Improving Product Quality and Productivity of Bispecific Molecules Through the Application of Continuous Perfusion PrinciplesBiotechnology Progress DOI 10.1002/btpr.2973

双抗的SE-UHPLC的变异水平取决于细胞株类型。FB工艺中构型1和构型II的HMW为10-50%而构型III的HMW[dll_replace]lt;5%LMW [dll_replace]gt;15%(图3)。特别地细胞株BC和E在PER工艺中产物的HMW比FB工艺中的产物的HMW划分低了72% (p [dll_replace]lt; 0.0001)、59% (p [dll_replace]lt; 0.0001)和26% (p = 0.0018) (图3B表2)。此外C分子的LMW水平也较低(图3 C)。近期研究讲明对构型1的双抗而言HMW的形成与卵白的浓度有关。因为灌流工艺的卵白浓度维持在FB工艺收获时的titer浓度的40%这可能是降低HMW值一个因素但影响的级别可能与细胞株自己有关。再者细胞株A和D在灌流工艺中体现出较高的HMW值只管不显著(A增加了14%p = 0.03;D增加了25%p= 0.19)这说明效果可能因细胞株类型而异。

关键词:产物相关杂质产能双抗.

2.质料与方法

2.1分批补料(以下简称FB)工艺和灌流(以下简称PER)工艺

图1 显示与FB工艺相比最高VCD增加3 - 6倍Via[dll_replace]gt;80%日产物浓度不到FB工艺终产物浓度的40%IVCD值提高了9 - 21倍 (图2A表2)HCCF总产量也有相应的提高(图2B表2)。与12天的FB工艺相比经由约40天的灌流造就HCCF的日产量增加了3 - 8倍(图2C表2)。这些日产量的提高与其它关于高细胞密度灌流的单克隆抗体或其它生物制品的文献报道一致讲明这一研究的普遍性。

通过其它优化造就参数方法如温度、pH或造就基很有可能使其在FB(以及PER)中修饰后的残留物水平进一步降低。可是卵白产物在反映器内的停留时间参数只有在PER中可以调整而在FB中则不能PER工艺提供了可以控制这些随着在造就情况条件下造就时间的变化而改变的氨基酸残基的优势。

图5. 细胞株A,D和F在PER(蓝)和FB(红)工艺中的电荷异构体的定量分析(CEX-HPLC法)

perfusion工艺中影响产物得率的3个主要因素有哪些?

表1 .差别双抗结构和细胞株在FB和PER两种工艺中的造就、纯化和分析方案

注意:细胞株EPER造就时间为23天(其它细胞株造就时间35-42天)为了更好地举行数据比力统一对PER工艺接纳理论天数38天举行盘算

2.2产物质量的分析方法

工艺加油站|灌流工艺助力双抗生产

1.摘 要双特异性蛋白的结构比传统的单克隆抗体(mAbs)更复杂。因为需要两个不同的位点/域来进行表位绑定,因为这个增加了分子的复杂性,双特异性分子较难表达,与单克隆抗体相比,...

工艺加油站|灌流工艺助力双抗生产

1.摘 要双特异性蛋白的结构比传统的单克隆抗体(mAbs)更复杂。因为需要两个不同的位点/域来进行表位绑定,因为这个增加了分子的复杂性,双特异性分子较难表达,与单克隆抗体相比,...

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